隨著技術的發(fā)展,雙光子顯微鏡的性能得到不斷地優(yōu)化,結合它的特點,大致可以分成深和活兩個方面的提升。深要想讓激發(fā)激光進入更深的層面,大致可從兩個方面入手,裝置優(yōu)化與標本改造。關于裝置優(yōu)化,我們可以把激光束變得更細,使能量更加集中,就能讓激光穿透更深。關于標本,其...
功能光學成像技術的發(fā)展使研究腦區(qū)和神經(jīng)元的內(nèi)部工作成為可能。隨著功能光學成像技術的發(fā)展,神經(jīng)學家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細胞內(nèi)游離鈣離子濃...
利用鈣成像技術記錄大腦活動,隨著功能光學成像技術的發(fā)展,神經(jīng)學家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細胞內(nèi)游離鈣離子濃度,以此細胞的功能狀態(tài)。目前它被...
鈣離子成像技術(Calciumimaging)是指利用鈣離子指示劑監(jiān)測組織內(nèi)鈣離子濃度的方法,常用于神經(jīng)系統(tǒng)的研究,指示神經(jīng)元內(nèi)鈣離子的變化,提示神經(jīng)元活動。其原理在于借助鈣離子濃度與神經(jīng)元活動之間的嚴格對應關系,利用特殊的熒光染料或者蛋白質熒光探針(鈣離子指...
鈣離子成像系統(tǒng):傳統(tǒng)的寬場熒光顯微鏡由于光散射的影響,只能夠對大腦淺層的神經(jīng)元或在離體組織上進行成像,共聚焦顯微鏡由于光損傷較大,一般也只用于離體鈣成像。隨著熒光顯微鏡技術的迅速發(fā)展,在體鈣成像技術得到了蓬勃發(fā)展。雙光子熒光顯微鏡能夠在進行成像的時候實現(xiàn)高分辨...
鈣成像技術在許多領域都有廣泛的應用,以下是一些常見的應用場景:1.神經(jīng)科學研究:鈣成像技術被廣泛應用于研究神經(jīng)元活動和神經(jīng)網(wǎng)絡的功能??梢杂^察神經(jīng)元的鈣離子動態(tài)變化,揭示神經(jīng)元的興奮性和抑制性活動,研究神經(jīng)網(wǎng)絡的連接和信息傳遞。2.細胞信號傳導研究:鈣離子在細...
可見光激發(fā)Ca2+熒光探針與紫外光激發(fā)探針相比,可見光激發(fā)Ca2+探針具有更強的染料吸收性能,對Ca2+變化水平檢測敏感度也更高,能夠降低對活細胞的光毒性和樣品自發(fā)熒光以及光散射的干擾,且無光譜偏移。常使用的可見光激發(fā)Ca2+熒光探針有Fluo-3,F(xiàn)luo-...
功能光學成像技術的發(fā)展使研究腦區(qū)和神經(jīng)元的內(nèi)部工作成為可能。隨著功能光學成像技術的發(fā)展,神經(jīng)學家們已經(jīng)可以研究腦區(qū)和神經(jīng)元內(nèi)部的工作情況。功能鈣成像技術就是其中之一,其主要原理是將外源性熒光信號和生理現(xiàn)象耦合起來——通過熒光染料信號的改變反映細胞內(nèi)游離鈣離子濃...
全細胞記錄構型(whole-cellrecording)高阻封接形成后,繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內(nèi)細胞膜破裂,電極胞內(nèi)液直接相通,而與浴槽液絕緣,這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,或將玻管連到標準高阻微電...
哥倫比亞大學ZuckermanMind大腦行為研究所的RuiM.Costa課題組于2020年10月7日在Cell雜志上發(fā)表了一篇題為AnAmygdalaCircuitMediatesExperience-DependentMomentaryArrestsdur...
在形成高阻抗封接后,記錄實驗結果之前,通常要根據(jù)實驗的要求進行參數(shù)補償,以期獲得符合實際的結果。需要注意的是,應恰當設置放大器的帶寬,例如10kHz,這樣在電流監(jiān)測端將觀察不到超越此頻帶以外的無用信息。膜片鉗實驗難度大、技術要求高,要掌握有關技術和方法雖不是很...
鈣離子在很多生理活動中都發(fā)揮著重要作用,除了在肌肉細胞收縮中扮演著重要的角色,鈣離子也是神經(jīng)元活動的重要“風向標”之一:當神經(jīng)元膜電位發(fā)生去極化,產(chǎn)生的動作電位傳導到神經(jīng)元軸突末梢時,細胞膜上的電壓門控鈣離子通道打開,大量鈣離子內(nèi)流,包含神經(jīng)遞質的囊泡由突觸前...
ePatch雖然設備非常小巧,但功能完備,傳統(tǒng)膜片鉗設備能做的實驗,用ePatch幾乎都能做。具有voltage-clamp,current-clamp,zerocurrent-clamp三種模式,自動電極電壓飄移補償,C-fast-C-slow-R-seri...
實驗從理論和實驗上評估了多焦點v2PE顯微鏡的空間分辨率,并與單光子熒光顯微鏡進行了對比,實驗中v2PE的激發(fā)波長為521nm,使用放大倍率為100倍的物鏡,尺寸為0.6AU,對直徑100nm的熒光顆粒進行了測試性成像,共獲得40幅不同采樣深度的圖像合成為三維...
1976年德國馬普生物物理化學研究所Neher和Sakmann在青蛙肌細胞上記錄記錄到AChjihuo的單通道離子電流1980年Sigworth等用負壓吸引,得到10-100GΩ的高阻封接(Giga-sea1),降低了記錄時的噪聲1981年Hamill和Neh...
對電極持續(xù)施加一個1mV、10~50ms的階躍脈沖刺激,電極入水后電阻約4~6MΩ,此時在計算機屏幕顯示框中可看到測試脈沖產(chǎn)生的電流波形。開始時增益不宜設得太高,一般可在1~5mV/pA,以免放大器飽和。由于細胞外液與電極內(nèi)液之間離子成分的差異造成了液結電位,...
單光子顯微技術是成熟的熒光顯微技術,但由于其使用的激發(fā)光波長較短,成像深度有限;能量較大,會造成對熒光物質的漂白,光毒性嚴重。激光共焦掃描顯微鏡由于共焦顯微鏡的孔徑很小,實現(xiàn)樣本三維成像要逐點掃描,成像速度慢,對樣本損害大,很難用于長時間活細胞成像。而寬場顯微...
膜片鉗技術的發(fā)展∶全自動膜片鉗技術(Automatedpatchclamptechnique)的出現(xiàn)標志著膜片鉗技術已經(jīng)發(fā)展到了一個嶄新階段,從這個意義上說,前面所講的膜片鉗技術我們稱之為傳統(tǒng)膜片鉗技術(Traditionalpatchclamptechniq...
膜片鉗技術∶從一小片(約幾平方微米)膜獲取電子學方面信息的技術,即保持跨膜電壓恒定——電壓鉗位,從而測量通過膜離子電流大小的技術。通過研究離子通道的離子流,從而了解離子運輸、信號傳遞等信息?;驹恚豪秘摲答侂娮泳€路,將微電極前列所吸附的一個至幾個平方微米的...
像差問題一直困擾著光學領域的工作者。像差會使光波前發(fā)生形變,不僅降低成像的信噪比和分辨率,使得很多時候我們只能“霧里看花”,更甚者,產(chǎn)生贗像,或無法獲得有意義的圖像。像差問題對雙光子成像的影響尤為嚴重,因為在那里,熒光信號對入射光強度的依賴是平方關系,一旦入射...
膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或...
細胞是動物和人體的基本組成單元,細胞與細胞內(nèi)的通信,是依靠其膜上的離子通道進行的,離子和離子通道是細胞興奮的基礎,亦即產(chǎn)生生物電信號的基礎,生物電信號通常用電學或電子學方法進行測量。由此形成了一門細胞學科———電生理學(electrophysiology),即...
膜片鉗在通道研究中起著重要的作用。膜片鉗技術可以直接觀察和區(qū)分單個離子通道電流及其開閉時間,區(qū)分離子通道的離子選擇性,同時發(fā)現(xiàn)新的離子通道和亞型,在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上,進一步計算細胞膜上的通道數(shù)和開放概率。也可用于研究某些細胞內(nèi)或細胞外物質對離...
電壓鉗的缺點:目前電壓鉗技術主要用于研究巨火細胞的全細胞電流,特別是在分子克隆卵母細胞表達電流的鑒定中,發(fā)揮著不可替代的作用。然而,它也有其致命的弱點:1。微電極需要刺穿細胞膜進入細胞,導致細胞質丟失,破壞細胞生理功能的完整性;2、不能確定單通道電流。由于電壓...
PiezoSleep無創(chuàng)睡眠監(jiān)測系統(tǒng)只需要將實驗動物直接放在實驗籠內(nèi),儀器自動監(jiān)測,無任何手術操作。PiezoSleep無創(chuàng)睡眠監(jiān)測系統(tǒng)無創(chuàng)睡眠監(jiān)測系統(tǒng)、在自由行為動物上進行睡眠/覺醒的追蹤監(jiān)測,建立一個無創(chuàng)睡眠的實驗環(huán)境在不對動物進行任何的手術,不對動物造成...
剛好雙光子在這兩點具有很大的優(yōu)勢在實際操作中成像的深度和樣品的關系很大,雙光子成像利用高亮度的熒光標記材料,已經(jīng)有做到mm級別的穿透深度HighqualitycellularTPimagingwithhighsignal-to-backgroundratio(...
無創(chuàng)睡眠監(jiān)視系統(tǒng)不僅具有高精度和高可靠性,同時也非常方便使用。該系統(tǒng)只需要將實驗動物直接放在實驗籠內(nèi),儀器會自動監(jiān)測并記錄實驗動物的睡眠數(shù)據(jù)。整個過程無需任何人工操作,減少了人為誤差和操作難度。此外,因斯蔻浦的無創(chuàng)睡眠監(jiān)視系統(tǒng)還具有強大的數(shù)據(jù)處理和分析能力。通...
SignalSolutions分析軟件SleepStatsDataExplorer使用統(tǒng)計方法將從壓電傳感器收集的數(shù)據(jù)分為2種狀態(tài),即“睡眠”和“覺醒”。使用從數(shù)據(jù)中提取的一組特征將其分為“睡眠”或“覺醒”來完成分類。通過對小鼠進行同步腦電圖(EEG)和無創(chuàng)睡...
Piezosleep無創(chuàng)小動物睡眠/覺醒行為監(jiān)測系統(tǒng)是一套綜合性的睡眠/覺醒周期行為活動的監(jiān)測系統(tǒng),性價比高且完全無創(chuàng)。在自有活動的小動物身上進行睡眠/覺醒的追蹤監(jiān)測,建立一個無創(chuàng)睡眠的監(jiān)測環(huán)境。在無需手工且不對動物造成任何損傷的情況下,讓動物保持完整的、無創(chuàng)...
膜片鉗的基本原理則是利用負反饋電子線路,將微電極前列所吸附的一個至幾個平方微米的細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)觀察,從而研究其功能。膜片鉗技術實現(xiàn)膜電流固定的關鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細胞膜之間形成高阻密封,其阻抗數(shù)值...