在原核表達(dá)系統(tǒng)中外源基因不僅進(jìn)行正向轉(zhuǎn)錄,有時(shí)還存在反向轉(zhuǎn)錄(即生成反義RNA),這種現(xiàn)象往往是外源基因表達(dá)不高的重要原因。另外,在真核系統(tǒng),某些基因也存在反向轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)生反義RNA,參與自身表達(dá)的調(diào)控。在這些情況下,要準(zhǔn)確測(cè)定正向和反向轉(zhuǎn)錄水平就不能用雙鏈DNA探針,而只能用RNA探針或單鏈DNA探針。探針是能與特異靶分子反應(yīng)并帶有供反應(yīng)后檢測(cè)的合適標(biāo)記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補(bǔ)的原理,用特異的基因探針即識(shí)別特異堿基序列的有標(biāo)記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測(cè)定的靶序列互補(bǔ),以檢測(cè)被測(cè)靶序列的技術(shù)叫核酸探針技術(shù)。探針制備就是將目的基因進(jìn)行標(biāo)記。原子序數(shù)12至22的元素要在真空下進(jìn)行成分測(cè)定,原子序數(shù)12以?xún)?nèi)的元素需要增添一些特殊設(shè)備才能分析。普陀區(qū)質(zhì)量探針品牌
電子探針又稱(chēng)微區(qū)X射線(xiàn)光譜分析儀、X射線(xiàn)顯微分析儀。其原理是利用聚焦的高能電子束轟擊固體表面,使被轟擊的元素激發(fā)出特征X射線(xiàn),按其波長(zhǎng)及強(qiáng)度對(duì)固體表面微區(qū)進(jìn)行定性及定量化學(xué)分析。主要用來(lái)分析固體物質(zhì)表面的細(xì)小顆?;蛭⑿^(qū)域,**小范圍直徑為1μm左右。分析元素從原子序數(shù)3(鋰)至92(鈾)。***感量可達(dá)10-14至10-15g。近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯(lián)合裝置,可在觀(guān)察微區(qū)形貌的同時(shí)逐點(diǎn)分析試樣的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)。廣泛應(yīng)用于地質(zhì)、冶金材料、水泥熟料研究等部門(mén)。如圖《電子探針示意圖》所示。金山區(qū)質(zhì)量探針維修價(jià)格它的作用是選擇和確定分析點(diǎn)。
用此探針在DNA文庫(kù)中篩選,陽(yáng)性克隆即是目標(biāo)蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細(xì)胞和原核細(xì)胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內(nèi)含子序列,而原核則沒(méi)有。因此,真核基因組DNA探針用于檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針(包括cDNA探針)的主要優(yōu)點(diǎn)有下面三點(diǎn):①這類(lèi)探針多克隆在質(zhì)粒載體中,可以無(wú)限繁殖,取之不盡,制備方法簡(jiǎn)便。②DNA探針不易降解(相對(duì)RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標(biāo)記方法較成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移,隨機(jī)引物法,PCR標(biāo)記法等,能用于同位素和非同位素標(biāo)記。
血凝素與生物素有非常高的親和性,當(dāng)血凝素標(biāo)記上過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶,經(jīng)雜交反應(yīng)**終形成探針-生物素-血凝素酶復(fù)合物(ABC法),酶催化底物顯色,觀(guān)察結(jié)果。ABC法底物顯色生成不溶物,以便觀(guān)測(cè)結(jié)果。酶標(biāo)記法復(fù)雜、重復(fù)性差,成本高,但便于運(yùn)輸、保存,靈敏度與放射物標(biāo)記法相當(dāng)。探針標(biāo)記方法①缺口平移標(biāo)記法。利用的是DNA聚合酶I能修復(fù)DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機(jī)切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同時(shí)在3´端修復(fù)加入被標(biāo)記核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低、比活性相對(duì)較高、標(biāo)記均勻,多用于大分子DNA標(biāo)記,(>1000bp比較好),但單鏈DNA、RNA不能用該法標(biāo)記。探針卡應(yīng)用在IC尚未封裝前,針對(duì)裸晶系以探針做功能測(cè)試,篩選出不良品、再進(jìn)行之后的封裝工程。
B、在線(xiàn)測(cè)試探針:PCB線(xiàn)路板安裝元器件后的檢測(cè)探針;**產(chǎn)品的**技術(shù)還是掌握在國(guó)外公司手中,國(guó)內(nèi)部分探針產(chǎn)品已研發(fā)成功,可替代進(jìn)口探針產(chǎn)品;C、微電子測(cè)試探針:即晶圓測(cè)試或芯片IC檢測(cè)探針,**技術(shù)還是掌握在國(guó)外公司手中,國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠(chǎng)商積極參與研發(fā),但只有一小部分成功生產(chǎn)。探針主要類(lèi)型:懸臂探針和垂直探針。懸臂探針:劈刀型(Blade Type)和環(huán)氧樹(shù)脂型(Epoxy Type)垂直探針:垂直型(Vertical Type)1.ICT探針 (ICT series Probes)一般直徑在2.54mm-1.27mm之間,有業(yè)內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)稱(chēng)呼100mil,75mil,50mil,還有更特別的直徑只有0.19mm,主要用于在線(xiàn)電路測(cè)試和功能測(cè)試.也稱(chēng)ICT測(cè)試和FCT測(cè)試.也是目應(yīng)用較多的一種探針.分析元素從原子序數(shù)3(鋰)至92(鈾)。感量可達(dá)10-14至10-15g。普陀區(qū)質(zhì)量探針品牌
分析范圍廣。Z>4其中,波譜:Be~U,能譜:Na~U。普陀區(qū)質(zhì)量探針品牌
(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。被激發(fā)原子發(fā)射特征X射線(xiàn)譜過(guò)程如下:圍繞原子核運(yùn)動(dòng)的內(nèi)層電子,被電子束的電子轟擊后,其他外層電子為補(bǔ)充轟擊出的電子而發(fā)生躍遷,在躍遷過(guò)程中釋放出能量,即發(fā)射出X射線(xiàn)。(2)X射線(xiàn)譜儀。測(cè)量各種元素產(chǎn)生的X射線(xiàn)波長(zhǎng)和強(qiáng)度,并以此對(duì)微小體積中所含元素進(jìn)行定性和定量分析。特征X射線(xiàn)圖像顯像管的原理是:X射線(xiàn)束入射到一已知晶面間距的晶體上(X射線(xiàn)分光光度計(jì)的彎曲晶體上),經(jīng)衍射后各種波長(zhǎng)的X射線(xiàn)按不同的布拉格角彼此分開(kāi),因此如轉(zhuǎn)動(dòng)晶體,改變衍射角,同時(shí)以?xún)杀队诰w的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)動(dòng)計(jì)數(shù)器,就可以依次測(cè)量出各種元素所產(chǎn)生的X射線(xiàn)波長(zhǎng)和強(qiáng)度,達(dá)到定性和定量分析的目的。普陀區(qū)質(zhì)量探針品牌
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